二代测序原理及应用
二代测序作为一种检测手段，主要应用于基因的生殖变异（遗传性）与体细胞变异（获得性）的检测。
二代测序应用如下：Illumina 原理：桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像。Roche 454：油包水PCR + 4种dNTP车轮大战 + 检测焦磷酸水解发光。Ion Torrent 原理：油包水PCR + 4种dNTP车轮大战 + 微电极PH检测。
第二代测序技术的核心思想是边合成边测序，即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列，现有的技术平台主要包括Roche/454 FLX、Illumina/Solexa Genome Analyzer和Applied Biosystems SOLID system。
第二代测序（Next-generation sequencing，NGS）又称为高通量测序（High-throughput sequencing），是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术。
线粒体基因组的疾病关系
1、线粒体基因病(Mitochondrial genic disorders)线粒体基因组中发生基因突变所导致的一类疾病，其传递和表达完全不同于由核基因突变引起的疾病，是一组独特的遗传病，称为线粒体基因病。
2、母系遗传如楼上所说。致病程度和子代可能健康，是因为线粒体基因的突变是单个线粒体的事件，而人类细胞中含有很多线粒体。从概率上看，表现为有的线粒体致病，有的健康。所以会导致致病程度上存在差异。
3、缺失或突变造成的疾病。位于线粒体的致病基因，呈母性遗传方式，男女两性均可患病。它们共同的临床表现为智力、运动发育迟缓，智力低下，身材矮小，肌张力降低。血液乳酸及丙酮酸的测定有助于诊断，肌肉活检可进一步帮助确诊。
4、线粒体遗传病在临床上主要包括线粒体肌病以及线粒体脑肌病，主要原因与基因遗传缺陷、线粒体代谢酶的缺乏有一定的关系。
5、线粒体里也含有DNA，受精卵中的线粒体全部来源与母本，能遗传母本上的某些疾病。线粒体基因组是一个线粒体内的所有基因，因为各个线粒体内基因相同。
PCR定量检测mtDNA损伤及拷贝数变化
1、为更准确定量检测mtDNA损伤和拷贝数的改变，Detroit R&D公司新推出了两款通过PCR定量分析检测mtDNA损伤和拷贝数的试剂盒。mtDNA损伤分析试剂盒 该试剂盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、细胞或组织。
2、一般检测方法有若是测序结果，可选用censor软件检测相关拷贝数。
3、而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。
4、要得到确切的基因拷贝数，一定要做绝对定量，即用一系列已知拷贝数的标准品做标准曲线，然后根据CT值计算出样本的起始模板的拷贝数。
